奥林巴斯显微镜故障排除显微镜配置和其他常见错误

显微摄影，喜欢任何形式的摄影，是容易发生各种故障和错误不管的显微镜设备或经验水平和技能的显微摄影复杂性。   错误必须仔细检查识别的源码，这通常是由于无论是设备故障，可怜的试样制备技术，不当，或处理错误。 
 大多数摄影错误可以追溯到奥林巴斯显微镜的光学结构，包括调整不当的照明，使用错误的过滤器，或不正确的设置的聚光镜和/或光圈。   下一个最常见的问题的出现是由于较差的试样制备和污垢，灰尘，油脂或污染的标本或光学显微镜。   图1给出了一个照片的小麦锈病脓疱（由感染由真菌引起的  柄锈菌  几种常见的错误说明摄影）。   本图的中心部分（括在一个白色的圆圈）失去了焦点，和左上和右角上表现出的阴影从视场光阑和渐晕。   在使用黑白电影摄影对比误差在图1的左下部分表示为一个地区显示对比度的过滤器，导致在显微图像的对比度太差的选择。   球面像差焦点问题和试样的细节和由于振动，比较缺乏，污染油对物镜镜头前说明在白色的圆圈在图1的右侧。   也包括在显微照片是错误和粉尘污染的膜损伤。   这些和其他类似的错误，如标本染色，太多或太厚的使用，代表在常规摄影一技术人员面临的最常见的错误。   以下段落的具体地址错误和显微摄影并提出补救缺陷。 
图像离焦模糊或不清晰，  一个缺乏应有的关注和/或模糊的图像的代表之一，显微摄影中最常见的错误。   这些错误的来源通常是在显微镜下站或焦距调整不当的光学膜平面之间振动的结果。   经常出现在焦点，通过目镜将影像，但导致照片模糊或不清晰（图2（a））。   这是一个迹象表明，膜面和光学观察可能不齐焦。   在配备了调焦望远镜，显微镜，检查网线以确保它们是清晰的十字。   仔细调整目镜分划板之间的焦点（如果有）和调焦望远镜，两刻线同时在重点。   如果镜头揭示了一个重点是标本，但在照相目镜分划板不集中，然后将标本图像会出现反锐化掩膜和反之亦然。   用我们的交互式Java教程  光掩模原版操作  实践这一技术。 

齐焦的错误经常发生与低倍率（1倍）的物镜在焦膜面深度很浅，轻微的显微镜聚焦旋钮的结果在非锐化的图像信息调整（见图2（a））。   在这两个目镜与调焦望远镜刻线应清晰，与目镜的瞳距应妥善保养。   使用一个低倍率物镜（10倍）仔细聚焦试样通过目镜使用微米或标本与锋利的边缘清晰度。   其次，在调焦望远镜直到图像清晰的调整分划板，确保该网线薄十字也集中和明显的叠加时，在空中图像。   许多制造商提供售后重点援助，这是一个简单的可调放大镜，可以用来查看调焦望远镜分划板辅助聚焦调节。   调整目镜就齐焦与对方和调焦望远镜。   同时检查投影透镜或光电管目镜以确保其牢固就位。 

 当使用一个标准的单反相机后显微摄影，图像必须注重通过相机对焦取景器，这通常是一个毛玻璃屏。   在低倍镜下，屏幕上不存在一个问题，但如果地面玻璃表面过于粗糙，聚焦可以在更高的放大倍率变得困难。   如果发生此问题，切换到聚焦屏具有清晰的图像至关重要的焦点中心，或修改的大画幅相机的聚焦屏的固井小盖玻片到地面的玻璃屏幕表面（如建议  约翰德利  在他的书中”  通过显微摄影 “用加拿大胶作为胶粘剂）。   由此产生的结合提供了在屏幕的盖玻片覆盖的区域一个透明的中心。   多莉也建议用软铅笔或墨水画十字或印度的两条对角线上的玻璃表面固井在盖玻片之前。   这个程序提供了一套“十字”视差聚焦。 
 图2给出了一些照片，说明在显微镜聚焦误差（图2（a））和非锐化的图像由于振动（图2（c））。   标本是椴树一薄片（椴树）干沾四混合专为植物组织。   图2（a）描述了一个典型的照片，是不是在重点由于光学和胶片平面之间的距离调整不当引起的误差，通过以上讨论。   在右侧（图2（c））是一个照片相同的视场，但受剧烈振动，导致图像的清晰度损失。   图2的显微照片（b）说明了椴树染色薄片的焦点。 

 显微镜是谁像散和必须戴眼镜能生产经验的锐利的图像，即使试样出现在通过目镜的困难。   它往往是很难通过调焦望远镜而戴眼镜的焦点调整试样。   该方法是使用一组高眼点镜或聚焦望远镜改正问题。   与显微镜检查制造商确定这些配件可供。 

 焦点也可以是一个问题时，试样的制备是太厚或当显微镜幻灯片是在不经意间检查颠倒（图3（a））。   厚度误差常常可以使用长工作距离物镜克服，但最好的解决方法是重新使用较薄的切片标本或挤压盖玻片更紧密的制备。   一个倒置显微镜幻灯片的简单的解决办法是翻转过来，所以玻璃盖面临的物镜（图3（a）和3（b））。   偶尔，一些盖玻片就会粘在一起和由此产生的显微镜玻片标本制备过程中，将有两个或两个以上的盖玻片，引起球面像差问题产生的显微照片。   如果怀疑这个错误，仔细检查包含干涉条纹的存在的显微镜载玻片盖玻片，导致两个盖玻片之间的剩余空间将它。   力最高的盖玻片用镊子。 

 校正铤的高倍干物镜或高干物镜具有高数值孔径与不匹配的盖玻璃的使用不正确的调整（盖玻片）往往是不清晰的照片的原因（图3（c））。   这些错误是由于下或球面像差矫正当显微镜盖玻片要么太厚或太薄。   在这种情况下，就不可能精确聚焦显微镜获得清晰的图像。   在盖玻片厚度问题的解决方案是一个正确的厚度取代一个不合适的盖玻片（通常是1号½玻璃盖，平均为0.17毫米厚的0.16和0.19毫米）之间的一个标准差或使用物镜配备一个校正环可以被调整以符合盖玻片厚度。   如果盖玻片厚度不能调整（即，它是粘到试样滑动）或如果厚度是未知的和一个校正环的物镜是不可用的，那么问题有时可以利用类似的放大倍数的油浸物镜补救。   由于浸泡油的折射率，盖玻片厚度变化非常相似，变得不那么重要了。 
 显微照片如图3所示的球面像差误差的影响。   标本染色切片马铃薯（  马铃薯  ）与疫病菌感染的组织。   图3（a）显示一个倒置的影响（倒）的显微镜载玻片，导致图像中由于球面像差的对比度和清晰度。   同样地，图3（c）阐述了校正衣领上的高数值孔径和高放大倍率的物镜不正确的调整。   这个标本的盖玻片厚度为0.17毫米，但校正衣领被调整为一个0.23毫米厚。   图3（b）显示的照片应该出现在盖玻片厚度进行优化和显微镜是适当调整。 

 反锐化图像的另一个原因是油（或者浸泡油或天然油来自指纹）对物镜镜头前的照片上，目镜透镜（凸透镜），或标本的幻灯片。   在干燥的物镜前透镜目前油是一种常见的事故可能发生时，其物镜是放置在位置超过先前涂油滑。   如果一个立体显微镜是可用的，删除的物镜和/或照相目镜并仔细分析它在高放大倍率。   石油污染经常可以看到前面的镜头使用这种技术。   从显微镜镜头去除油可能是困难的，往往导致取代旧的灰尘在透镜与新的灰尘和碎片。   清洁镜头先轻轻去除多余的油从晶状体组织表面，然后用一个木制敷贴药棉或高质量的镜头纸擦拭镜头清洁后与三氯乙烷，滋润醚，或二甲苯。   避免使用过多的溶剂，可用于固定透镜攻击其山水泥。 

 污染的除油后，用驼毛或黑貂刷除去灰尘，污垢，或碎片，可能对镜头的存在。   刷可以脱脂浸入小体积的醚和摇动它干。   一个气球或橡胶耳注射器经常用来吹了松散的灰尘从镜头，但是不要用罐装空气，因为它可以留下残留物是更难以去除比浸泡油。   浸泡油污染最常发生在设计使用浸没介质物镜，但干的物镜也可以成为污染时，摆在一个盖玻片有残余油从观察使用浸没物镜。   经常检查干物镜前透镜污染时遇到错误或不清晰的图像的焦点与这些物镜。 
 在许多古老的显微镜，物镜是为了正确匹配到目镜的光学像差在最终图像。   非锐化的图像也可以通过显微镜主体管和物镜之间的不匹配造成的机械尺寸管长度。   最常用的固定长度的显微镜的物镜是设计一个160毫米的管的长度，但这是不变的和使用具有不匹配的管长度的物镜将导致球面像差的引入，降低图像的清晰度。   管长度的要求通常是刻在物镜筒，以保证在使用前检查该值的物镜是用显微镜兼容。   与无限光学校正的物镜是用于配备管透镜显微镜，和不使用旧标准的固定管长度的显微镜是合适的。   同样的，设计为一个固定的管的长度物镜不能用无限远校正显微镜。 

 图4说明了几个错误，通常采用浸泡油。   标本是一个多重染色薄片的苜蓿植物组织，已经感染了冠瘿病的真菌，  physoderma alfalfae 。   左边的照片（图4（a））演示了通过高倍放大形成的图像（60X）油浸物镜时，气泡被困的显微镜盖玻片和物镜的前透镜之间。   在这些条件下，所得到的图像模糊和不清晰的，遭受巨大的损失，对比。   如果目镜是删除，泡油可以在物镜后焦面清晰可见。   这个错误通常发生在油物镜，通常有一个稍凹的镜头前，降低至油池，一直放在盖玻片表面。物镜   不应放入浸泡油。   相反，最好的做法是“摇摆”的物镜为上方油与刷卡动作通过旋转接头避免空气滞留盖玻片和物镜的前透镜之间。   图4（c）阐述了类似条件下采取的照片，但用干60X物镜。   由此产生的图像是更好的焦点和具有比由图4显示了显着更多的对比（一）。   在这种情况下，图像质量的劣化是由于污染的油对物镜镜头前。   干物镜相邻放置在显微镜下物镜转盘的油浸物镜容易被油污染时的物镜是通过意外甩油池在显微镜盖玻片。   图4中的图像（b）是免费的错误和代表感染苜蓿组织应出现。 

 间歇对焦错误经常发生由于振动，通常被看到时，高倍率的物镜是用于长时间曝光。   用聚焦显微镜上使用可用的最高放大物镜大幅振动问题的试验样品。   连续振动通常会导致试样出现在运动。   振动与表或气流从空气处理机组和球迷会慢慢失去焦点显微镜。   允许显微镜同时聚焦在样品和测量振动带显微镜的聚焦所需的时间保持静止。   如果焦点落立即发生，某种形式的振动隔离是必需的。   然而，如果显微镜将在几分钟或更长的高倍率的焦点，然后振动具有足够低了大多数摄影一个微不足道的影响。 

 连续振动误差的影响可以用很快的快门速度来部分解决，通常在一个或几个百分之一秒的顺序。   电子闪光单元还可以用来与更快的快门速度来克服在显微摄影振动误差增加光照。   然而，这种补救只是最小化振动误差的影响并不会消除的原因。   在振动问题的显例，显微镜下应安装在振动隔离的一组合适的减震器。   一些显微镜制造商和一些售后供应商提供的振动“垫”（通常用氯丁橡胶，硅，或类似的聚合物），可以放在显微镜下足垫。 

 载物台漂移是一个问题，当载物台的重量引起的运动在显微镜聚焦架，降低载物台（标本），使显微镜失去焦点。   在许多现代显微镜，聚焦架张紧机构包括消除或减少漂移。   年长的显微镜，体验这个问题可能会有磨损或松动的焦点架应该由专业维修服务。 

 一些振动问题是由照相机的机械快门的行为引起的附件。   总是使用电缆释放具有机械快门和增加曝光时间超过一秒的中性密度滤光镜相机如果振动问题依然存在。   较长的曝光时间将减少闸门振动的影响，只发生在暴露在最初的部分。 

对比误差，差图像分辨率  贫穷的对比度通常是一个迹象表明，台下聚光镜孔径光阑打开太宽，导致耀斑和大大降低图像的对比度。   这个问题困扰着所有类型的摄影，包括颜色，黑色和白色，和数字。   要纠正这个问题，去掉其中的目镜和插入相位望远镜进入眼管或（如果显微镜装有）摆动的贝特朗透镜的光路。   同时观察物镜后焦平面，调节聚光镜孔径光阑直径是65和百分之80，直到它的物镜之间的缝隙（达到适当的  柯勒照明  和最大限度地提高图像的对比度）。   使用反射光显微镜时，调整视场光阑孔径光阑和改善对比度。 

 如上所述，利用盖玻片，有一个不正确的厚度也可能导致的损失，对比高数值孔径的物镜（和图像清晰度的缺乏）由于球面像差。   检查物镜桶是否与盖玻片厚度，或切换到一个盖玻片厚度校正环的物镜。   反射光的物镜是观察和显微摄影没有校正盖玻片的使用，以避免这种类型的物镜上。 

 试样本身可以对比问题的根源。   透明的和未染色的标本是很难使用明场照明图像时使用的对比增强技术，如相对比，产生更好的照片，霍夫曼调制对比度，或微分干涉对比。   斜光照也会提高未染色标本的对比。 

 在黑白摄影技术对比过滤器时，可怜的过滤器的选择往往会导致缺乏导致试样的对比照片。   正确使用对比的过滤器将当用染色标本确保更好的再现的标本细节，但只有当过滤器的颜色是互补的标本。   当光的颜色相同的染色标本是透过试样，其结果是减少了试样与背景的对比度。   使用时，有最小的或仅部分吸收在该地区的试样吸收可见光滤波器得到最佳的结果。   对比也可以在黑色和白色的高反差胶片使用显微摄影术的改进（如柯达技术PAN）或通过化学开发商产生高对比度的使用。 

 在显微摄影的几种对比误差在图5，这说明了一系列的多彩色马铃薯明场图像（  马铃薯  ）组织薄片。   左边的照片（图5（a））被fujichrome 64t，钨平衡的透明薄膜，通常显示的对比度显着量当妥善处理。   在这种情况下，图像是缺乏由于不当的处理和/或聚光镜孔径光阑打开太宽的对比。   图5（c）说明了一个黑白照片拍摄的同一领域，但使用不同的过滤器和加工有高反差显影液。   图5中的对比过量（C）是由于使用的增加在黑白摄影的对比色过滤器不正确的选择。   而不是使用一个过滤器，在可见光谱的绿色区域部分吸收（带出红色的vesicules对比），一个柯达Wratten 25号红色滤光片进行曝光和电影然后在产生的过多的对比条件下开发商错误处理。   中心的照片（图5（b））说明了马铃薯薄片作为它应该出现。 

 可怜的对比也可以发生在成像样品太厚，上面详细讨论。   这种情况可以通过仔细的样品制备克服使用较薄的标本，用盖玻片固定到位并用透明胶固定，如加拿大香脂。 

 虽然少了彩色电影的问题，太多的对比，在黑白摄影经常发生。   主要的原因，如上面所讨论的，是与染色标本对比滤波器不正确的选择，但薄膜的加工误差也应该怀疑。   使用高对比度的电影如柯达技术便时，薄膜的开发者的选择应符合用于捕获图像的滤波相结合。   如果对比滤波器设计减少试样的对比选择，那么开发者也应该产生的低对比度图像的黑白底片。   相反，当使用对比的过滤器来提高试样的对比，选择一个高对比度的软件工程师，在最终图像的对比度产生正确的金额。   使用一个正常的膜的高对比度的开发商往往会导致过多的对比度的图像，将延长开发时间。   因为选择电影的大范围内的黑白电影和发展代理商，应该高度重视发展过程中以产生微调对比照片。 

 在显微摄影分辨率差通常是对于台下聚光镜孔径光阑调整不当的结果。   当一个显微镜是正确配置  柯勒照明  孔径光阑，应该有一个虹膜直径开口位于65和百分之80之间的缝隙的物镜。   如果打开隔膜太远，会造成图像的对比度差（图6（a））和照片将遭受损失的知名度。   如果光圈开缩小到直径小于物镜孔径百分之50，分辨率明显减少伪影的照片成为明显的衍射。   当孔径光阑孔减少到最小，严重恶化的发生和照片变得黑暗和模糊的衍射效应，主要是暗晕周围的精细结构的细节边缘。   类似的情况发生时，台下聚光镜设置太低，在显微镜台。   这两个错误是在大小和聚光镜产生的光照锥质量下降的结果，不允许物镜在其完整的数值孔径的操作。 
 在显微摄影常用的分辨率误差，如图6所示，它说明了一系列的梅花树茎组织显微染色薄片染黑的结，一个梅花病害的真菌引起的  病梨孢  （也被称为  口蘑为  ）。   梅花树组织切片选择性着色透露细节和区分亚细胞成分之间的观察。   在这张图中，凝汽器孔径光阑开口设置在捕获显微图像质量的影响，利用fujichrome 64t透明膜与物镜显示（40x planachromat  钠 = 0.75）和摆上镜头的消色差聚光镜（  钠 = 0.90）。   近似聚光镜开口尺寸  ：  图6（a）～百分之95（  钠 = 0.81）；图6（b）-百分之60（  钠 = 0.54）；和，图6（c）百分之20（  钠 = 0.18）。 

 图6（a），其中孔径光阑设置一个位置中，聚光镜和物镜数值孔径是相等的，多的很好的标本细节是可见的，但仍有相当数量的散射和眩光和整体形象的对比严重损害。   形象也比其同行更明显，这是与一个较小的光圈设置了。   图6（b）显示在聚光镜孔径大小，产生一个数值孔径约百分之70的物镜梅干。   减少眩光，形象十分鲜明，和精细的图像细节是目前没有明显的衍射效应。   这个标本，在图6的显微照片（b）代表聚光镜孔径光阑的优化设置。   当膜片关闭到最小的设置对物镜的数值孔径百分之25（图6（c）），精细的图像细节变得模糊的衍射效应。   图像还需要在一个黑暗的整体铸造生产的试样中的颜色变化。   这个概念可以更详细的使用交互式Java教程的分期探讨聚光镜  孔径光阑  。 

 从上面的讨论很明显，聚光镜孔径光阑应该设置一个位置，将提供一个折衷的混合物直接与偏转光，取决于，在很大程度上，吸收，衍射，和试样的折射特性。   这一定是没有压倒文物，模糊的细节和对比增强图像完成错误。   图像细节和对比了必要的生产最好的照片也依赖于折射率，和其他标本的相关的参数的光学特性。   利用对比度增强技术时，显微镜的适当调整和配置是保证这些特殊条件下试样的准确再现的重要细节。 

 当孔径光阑误关得太远，偏离光开始模糊的直接照明光线，产生衍射的文物，造成明显的条纹，条纹，在显微照片和/或模式的形成。   其他问题，如折射现象，也可以在一个图像，不是真正的产生明显的结构。   另外，打开聚光镜孔径过大引起不必要的眩光和光散射从样品表面的光学显微镜。   这导致了对比和洗出来的图像细节的重大损失。   正确的设置会有所不同，从试样试样，和经验丰富的技术人员将很快学会准确地调节聚光镜孔径光阑（和系统的数值孔径）通过观察图像而无需在物镜的后焦平面膜片。   事实上，许多显微镜相信显微镜系统的数值孔径的临界压优化图像质量是摄影最重要的一步。 

照明误差  建立适当的条件  柯勒照明(Köhler) 也许是关键的显微照相显微镜配置最重要的方面。   错误发生最频繁的照明光源时不正确的定位和/或物镜和聚光器不与彼此或与显微镜光轴中心。   轻微的这些组件的对准误差可能不显着，而通过目镜观察试样，但错误会导致照片的强度梯度的产量。   其结果将是一个照片显示不均匀光照与试样的图像或背景比其他更黑暗的一面。 

 当照片显示照明错误的证据，首先检查灯丝对齐，灯箱反射器的位置，和扩散的屏幕，位于光源与镜座之间。   一个失踪的扩散屏幕将导致灯丝被投影到样本图像共轭平面和可能导致的亮点，图像的暗斑，和照度不均匀的显微照片。   如果扩散屏幕正确定位，检查灯丝对齐（记得之前检查丝对准的光学路径去除扩散屏幕）。   目前许多显微镜特征预为中心的卤素灯和内置的扩散滤波器。   这些仪器，灯泡的灯丝中已经实现了在装配过程中，由制造商。   图7说明了显微镜的光端口的一个典型的看法时，纤维是通过放置一张白纸，可见毛玻璃，kimwipe，或在显微镜镜头清洁港口组织。   图7左侧的端口（一）包含一个灯丝是严重的对齐和不正确放置一个图像，将完全填充孔径光阑也不是物镜的后焦平面。   使用平移调整灯的外壳，灯丝成为关注的焦点（图7（b）），然后集中在光端口（图7（c））。 

 适当对准丝困难可以如果聚光透镜聚焦产生不正确。   大多数内置照明显微镜缺乏聚光透镜的调整，这是预对准和聚焦在工厂。   在这种情况下，显微镜下必须由训练有素的技术人员提供服务。   年长的显微镜可有聚光透镜调整，或可配备外辐射源，有各种各样的调整。   在灯丝被正确对齐，在灯箱与镜座之间的位置取代扩散屏幕。   请注意，在旧的显微镜配备钨灯泡，灯泡内的灯丝的位置可能会有所不同从一个到另一个灯。   然后恢复显微摄影，研究显微镜照明通过尽可能广泛的领域通过查看通过目镜没有标本中出现。   这是通过选择最低的倍率的物镜可放置一个中性密度过滤器的光路中，减少光照强度完成。   如果视野似乎仍然有不均匀的照明，然后对台下聚光镜对准的嫌疑。 

 该聚光器通常配有一副定心螺钉，使技术人员到中心的凝汽器相对于物镜和显微镜光轴。   本程序建立K hler照明ö是必要的，但聚光镜可以成为错误排列在日常使用的显微镜。   检查聚光镜位置，第一旋转10X物镜为轻度染色标本在显微镜载物台上的地位。   其次，通过提高或降低聚光器采用齿条机构位于下方的载物台重点视场光阑。   膜片应加在试样的聚焦图像和光圈关闭直到个别叶片出现清晰的虹膜开口直径约25-40 %的视场填充。   使用定心螺钉位于聚光镜壳体中心视场光阑开在视场和刀片打开直到他们只是视野之外的。   如果视场光阑叶片掩盖了太多的视野，他们可以是一个不均匀的照明光源。 

 物镜安装在旋转炮塔很少对准误差的来源是因为他们被固定到Dé缓和位置。   一些偏光显微镜有一个专门的物镜转盘允许物镜集中在光通路由一对定心螺钉装置。   这些物镜是特别有用，当耦合到一个预中心的圆形载物台，旋转通过一个360度角（旧显微镜配备一个循环载物台往往需要的个人物镜为中心）。   一个双折射试样可以放置在载物台上，用来协助中心的物镜在光学通路。   避免与MIS物镜一致的问题，经常检查以确保接头牢固地定位在Dé缓和指数停止范围。   旋转时，管口应“点击”的光学路径中的同一位置的每一个物镜。 

 渐暗的图像外边缘（俗称渐晕）在照片通常是由不正确的对准聚光器引起，或聚光镜设置不适当的高度在显微镜台。   当电容器配置不正确，在缩小孔径光阑开口尺寸，可以导致变黑的在领域的边缘，或渐晕在显微照片（图8（c））。   渐晕的另一个原因是使用具有放大系数与乳液膜的大小和无法满足全膜对角不兼容的照相机目镜，或有一个或大或小的长度比在膜平面图像工程是必要的目光管。   作为一个例子，一个4×5寸照片对角线为145毫米。   当使用一个0.63x倍率投影透镜（数字CCD相机常用的），有一个21毫米的场大小的10倍的目镜将产生一个图像直径132毫米，产生渐晕在图像的角落。   更改为1x或（更常见）2.5倍投影镜头产生210和525毫米字段大小，分别。   高倍率的投影镜头会产生是免费的晕影图像。 

 显微照片如图8所示的特征一个染色薄片胎猪的牙。   图8（a）显示牙齿薄片当灯丝不正确的中心。   在这种情况下，有一个逐渐暗淡的图像从右到左的照片。   渐晕的图像，如图8所示（C），这表现在逐渐暗淡的边缘处的图像区域，包括一个圆形图案包围图像由于不正确的聚光器高度。   当相机的快门速度太快让电影的反应也会发生此错误（快门速度比快0.01秒）。   图8的显微照片（b）显示的图像应该出现在显微镜照明配置得当。 

 当一个显微照片揭示黑暗的角落，清晰的光圈快门叶片图像，然后现场隔膜可能不充分打开，应在目镜是可见的。   的视场光阑虹膜开口大小适当的调整只是视野之外的至少包括场区外的照片。   结果在类似的显微照片的另一个错误（暗角）经常发生时，相机的快门位于太远高于视点。   在快速的快门速度，相机的快门叶片的图像可以被记录在照片的轮廓图像，错误被称为  快门阴影  。   虽然现代显微镜，经常有匹配的相机系统较少，快门阴影可以是一个问题时，将有一个完整的透镜系统的照相机。   在后者的情况下，镜头将决定视点位置。   为了缓解这个问题，把中性密度过滤器的光路中，增加的曝光时间，从而允许较慢的快门速度。 

黑斑和碎片  污垢，黑斑，和碎片的显微照片是问题的方法常见的来源，并可能发生在与图像或作为一个模糊的点上的薄膜的焦点。   这种类型的污染可以表现为有色神器使用彩色胶片的时候，又是黑白电影的黑色或灰色的斑点。   如果碎片出现在了大家关注的焦点，这通常是发生在透镜表面，居住在一个平面共轭聚焦试样污染。   物镜和任何玻璃（通常颜色平衡或校正滤波器）相邻的显微镜视场光阑往往容易收集灰尘，这些组件躺在附近的一个主要的图像共轭面。   污染的近场的隔膜将出现在电影焦点，和划痕或灰尘过滤器放置在视场光阑往往是一个源的烟雾和碎片的文物。   玻璃表面被划伤会出现在照片不清晰的地方，将气泡嵌在光源聚光玻璃或在吸热器。   通常这些气泡会有一个蓝色的色调时，记录在胶片上。   屏幕的玻璃内的灰尘和碎片或缺陷扩散屏幕表面污染（泡沫）的粉红色或蓝色斑点的显微照片的结果。 

 污垢和碎屑的另一个常见的来源是试样本身，也居住在一个共轭平面。   粘尘的盖玻片表面会出现无黑点在膜污染，而在盖玻片附近或混合试样通常会出现碎片是在与试样的焦点。   在中间图像平面透镜的灰尘和碎片是不常见的，但有时也会发生。   这架飞机是位于目镜固定膜，它可以成为污染当目镜是从显微镜镜头最近的固定膜片变脏。 

 当查看污染通过显微镜目镜，试图找到源头，慢慢把每个目镜单独确定碎片点旋转的一个目镜。   如果是这样的话，那么污染位于目镜本身。   旋转镜的光学路径中的其他组件，如滤波器，投影镜头，摄像系统，和聚光镜时，试图找到灰尘和碎片来源。   在某些情况下，它有助于捕捉构造一个记录是被转动的物镜显微照片。   将试样而来回通过目镜观察以确定碎片的动作与试样。   最后，摆动的物镜和聚光镜顶部透镜的流入和流出的光路，检查是否与物镜或聚光镜碎片移污染。 

 偶尔，纤维和纤维之间的楔形叶片可能成为在该领域的膜片或夹在膜载体内的相机或黑盒。   当这种情况发生时，碎片会出现清晰的（见图9（c））。   这种类型的污染是更难以诊断，可能存在一些问题与去除。   如果在视场光阑有杂物，一个经验丰富的维修工程师应采用显微镜清洗。   在相机的碎片后可以用压缩空气清除或驼毛刷。   从镜头，过滤器清洁污垢和碎片，和试样滑动应仔细做镜头纸或软棉拭子。   使用可压缩空气在距离或轻轻扫用驼毛刷举行删除任何松散的泥土。 

 图9给出了几种显微照片显示的灰尘和碎片除了场曲率误差污染误差。   标本是一个多重染色薄片苹果树感染雪松苹果锈干，影响了美国北部的落基山脉以东的苹果树的一种病。   它是由真菌引起的  苹果杜松virginianae 可落叶乔木和残疾的果实让他们卖不出去。   的显微照片示于图9（c）显示的灰尘，碎片重污染的影响，并对黑斑图像。   产生的一些原因，这些文物，和碎片可以在不同的区域上的显微镜和/或标本按上面的讨论。   图像的焦点问题产生的场曲像差瘟疫的照片如图9（a），它具有鲜明的定义在边缘，但在中心失去焦点。   这些错误的问题将在以后讨论。 

亮点和镜面反射  来自于从高架照明或辅助照明从外部光源的镜面反射，可以对照片的亮点。   这些错误是特别流行时，很长时间暴露在荧光显微照相。   为了解决这个问题，可以关闭顶灯（或辅助照明）或覆盖地区的直接影响。   上了年纪的显微镜类似的问题发生在当一个分束器是用来查看双目头和管之间的。   绕过这个问题通过调节分束器的位置的所有显微镜照明被引导到光电管。   反思也成为一个问题，当标本成像而沐浴在溶液中或通过一个非常厚的玻璃盖和/或标本夹（超过1毫米）使用长工作距离物镜。   有没有简单的治疗当成像通过厚厚的玻璃，但从水溶剂的表面反射可以采用水浸的物镜了。 

 在照片的亮点可以发生在传统的单反相机采用了积分镜头捕捉的图像。   类似的位置也与目镜照相机镜头，减少了在显微镜的投影透镜共同。   摄影机镜头的前表面应定位为接近投影透镜的出射点尽可能避免亮点。   如果太接近，物镜的后透镜的图像可以被记录为一个焦点上的电影。   现场将出现明亮的透明膜，或在彩色或黑白底片暗斑。   常能缓解这个问题可以通过重新定位相机相对于照相机目镜或投影透镜。   为了避免晕，小心不要太远的投影透镜移动摄像机。 

场曲率误差  当显微镜的边缘清晰，但中心已经失去了它的焦点（图9（a），这个问题可能是  场曲率  在物镜像差。   检查以确保它是标志物镜桶平场   指示物镜，一直是平坦的场光学矫正。   未矫正的物镜不会产生整个显微镜视场清晰的影像。   这个错误也会发生在反射光试样时，试样略倾斜或一个安装角。   要纠正这个问题，重新安装的标本或使用橡皮泥和压缩机提供一个可调的水平的基。   大多数物镜显示有限数量的场曲像差由于在轴和离轴成像光束路径的距离的变化。   在这种情况下，利用细聚焦旋钮漂移通过从边缘向中心集中，以确定场曲像差。   更换物镜与平场物镜未解决色差问题。   如果物镜更换几乎是不可能的，限制记录在照片的中心区域的领域尽可能，或安装一个高倍率的投影镜头减少字段大小。 

带雾  当照片显示带状区域，雾或淘汰，那么问题可能是通过打开相机非常简要的光线引起的。   这种情况也会发生在相机背面有沿铰链漏光或抓住。   雾度将取决于时间的后面是开放的长度和房间的光亮度。   为了缓解这一问题，使某些电影是完全重绕打开相机之前回来。   如果怀疑有漏光，有专业的维修人员检查相机回来。